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SPIO-Proten A/G的使用

有客户问ProteinA/G磁珠与 IgG实验问题,现答复如下(以SPIO为例,大磁珠的使用方法网上很多,不再详述):

 1 .吸取2 ml (5 mg/ml) protein A/G-SPIO 0.1 M PBS, pH: 7.4分离后去上清(用何种磁分离器可与我们联系)
 2 .2 ml 50 mM sodium borate, pH: 8.2 (BB) 洗涤上述磁珠,分离后去上清 
 3 .根据磁珠的结合能力(见COA),将10倍量的IgG(于2ml PBSBB液中)与磁珠混合
 4 .RT(18 - 25 °C) 下,混匀仪上轻柔摇荡45分钟 
 5 .如果实验目的是将IgG分离,可按如下操作: 分离后弃上清,重悬磁珠于1ml 0.1 M glycine * HCl, pH2.5 中,轻微振荡15分钟后,分离,吸取上清,用0.1M PBS透析后保存在2-4 摄氏度
 6 .如果实验的目的是获得SPIO-Protein A-IgG, 请继续下述操作(接step 4):分离弃上清后将磁珠重悬在0.9 ml BB + 0.1 ml 0.2 M triethanolamine, pH: 8.2 (CLB)中,分享后弃上清 
 7 .7 mg dimethyl pimelinimidate (DMP) 溶于1ml CLB中,即刻用于重悬磁珠,室温下,轻微摇匀1小时
 8 .分离后,加入1ml 0.1 M ethanolamine, pH: 8.2 淬灭液,室温下10分钟
 9 .分离后,用1ml 1 M NaCl, 0.1 M glycine (pH: 2.8), dd水逐步洗涤
 10 .磁珠重悬在0.1M PBS中(磁珠浓度一般为5mg/ml) 11 2-4 摄氏度保存待用。
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