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PBMC分离管的使用方法


1. 吸取16 ml Lymphoprep* 到50ml PBMC分离管内. (3ml for 15ml 管)
 
2. 室温下离心 1000 G,30 秒.
 
3. 加15-30 ml 新鲜抗凝血于管内(3-8ml for 15ml tube). 血液加之前不需要稀释,如果有需要,可以直接加在管内进行稀释.
 
4. 离心 1000 G,10 min. (或 800 G,15 min.)
 
5. 离心后,管内的分层如下:
Plasma-MNC-Lymphoprep-Filter-Lymphoprep-Erythrocytes.
 
6. 用巴斯德管收集单核细胞,或者移到另一干净管内 .
 
7. 加10ml的PBS洗涤单核细胞,用巴斯德管轻轻吹打细胞.然后离心250 G ,10 minutes .
 
8. 洗涤两次后,重悬细胞于 5 ml PBS缓冲液中.
 
9. 所得即为单核细胞.

*Separation-solution is available as: Lymphoprep (Nycomed Amersham)
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